İntraselüler Anoxybacillus amylolyticus ksilanaz’ının klonlanması, saflaştırılması ve karakterizasyonu

Abstract

Ksilanazlar [endo-1,4-β-D-ksilanaz (E.C. 3.2.1.8)] ksilanın çevre dostu bir yöntemle işlenmesine ihtiyaç duyulan endüstriyel birçok uygulamada kullanılan son derece önemli enzimlerdir. Bu çalışmada Anoxybacillus amyloliticus bakterisine ait intraselüler ksilanaz geni pET28a+ vektörüne klonlanarak üretilmiştir. Daha sonra enzim (AnaXYN329) saflaştırılarak enzimin sahip olduğu biyokimyasal ve kinetik özellikler açığa çıkarılmıştır. Elde edilen sonuçlara göre, AnaXYN329 en yüksek aktiviteyi pH 6.5’da; 60 ve 65 °C’de, göstermiştir. AnaXYN329 enziminin ısıl kararlılık deneyleri yaklaşık 120 dakika sürmüştür ve enzim yarılanma ömrünü 40. dakikada tamamlamıştır. Ayrıca enzimin Km değeri 3.631 ± 0.162 µg/µL, Vmax değeri 100.05 ± 0.00292 µmoL/dk/mg protein, kcat değeri 128,978 1/sn, kcat/Km değeri ise 35.514 olarak hesaplandı. Sonuç olarak AnaXYN329, endüstriyel uygulamalarda kullanılma potansiyeline sahiptir.